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如何選擇合適的內參抗體?

更新時間:2021-09-16點擊次數:4265

如何選擇合適的內參抗體?


Tips:在選擇內參抗體時,我們需要遵循幾個原則:

1.種屬來源
哺乳動物的樣本需要選擇哺乳動物中穩定表達的蛋白作為內參,同樣的,植物樣本需要選擇植物中穩定表達的蛋白作為內參。


2. 細胞定位
靶標蛋白的細胞定位不同,適合的內參也不同。如全細胞裂解液可選擇beta-actin、beta-tubulin等,膜蛋白一般選擇Na K ATPase,核蛋白則選擇Lamin B1、Histone H3等。

內參.png

3. 分子量
內參蛋白的分子量需要與目標蛋白的分子量有所區別,否則兩者條帶無法分開。一般目的蛋白與內參蛋白大小至少相差5K Da以上。


4. 表達因素
內參選擇還需要考慮實際的實驗環境。GAPDH是代謝類蛋白,在活組織中表達較穩定。beta-actin和beta-tubulin是結構蛋白,不同組織的細胞結構會有差異性。


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